Pētījums par pakārtotā procesa monoklonālo antivielu vīrusu attīrīšanas spēju
Biotehnoloģijas produkti, kas iegūti no šūnu līnijām, var būt pakļauti vīrusa piesārņojuma riskam – apjoms ir atkarīgs no vairākiem faktoriem, tostarp preparāta avota, izmantotajām izejvielām, ražošanas sistēmas, attīrīšanas reaģentiem un palīgvielām. Vīrusu noņemšanas vai inaktivācijas izpēte ražošanas procesā ir galvenais solis, lai samazinātu patogēno vīrusu jatrogēnas pārnešanas iespējamību un tādējādi samazinātu risku, kas ir būtiski produktu drošumam. Pirms bioloģiskos produktus var iekļaut klīniskajos pētījumos un laist tirgū, ir jāpierāda, ka to ražošanas process spēj noņemt zināmos un iespējamos vīrusus.
01 Monoklonālo antivielu produkta vīrusa drošības novērtējums
Vīrusa noņemšanas spējas izpēte parasti notiek, pievienojot zināmo titra indikatorvīrusu starpproduktam dažādos ražošanas posmos, pēc tam nosakot atlikuma vīrusa titru paraugā, kas apstrādāts ar konkrētu procesu, un visbeidzot novērtējot logaritmiskās samazināšanas vērtību (LRV). no vīrusa titra. Procesa soļi LRV, kas ir lielāki vai vienādi ar 4log10, parasti tiek uzskatīti par efektīviem vīrusu noņemšanas soļiem. Process ar LRV<41og10 can be considered as helpful to increase the total virus clearance in the production process. However, due to the limitations of virus verification, the process with LRV≤11og10 has little significance for virus removal, and its LRV value is not included in the total amount of the production process.
Lietojot imitētā ražošanas procesa metodi (samazinātais process), nepieciešams izstrādāt saprātīgu vīrusu noņemšanas/inaktivācijas izpētes un testēšanas plānu, kas pēc iespējas saistīts ar faktisko ražošanas procesu, īpaši efektīvajiem ražošanas procesa posmiem. Simulētajam procesam ir stingri jāatbilst faktiskajam procesam testa parametru un kontroles apstākļu ziņā.
02 Parasti norāda uz vīrusiem un pārbaudes shēmām
Izplatītākie indikatorvīrusi ir parādīti 1. tabulā.
Jaunu zāļu lietošanas (IND) pētnieciskajā stadijā biotehnoloģijas produktam ir nepieciešami vīrusu klīrensa pētījumi vismaz 2 modeļu vīrusiem, parasti izvēloties vienu retrovīrusu (X-MuLV) un vienu parvovīrusu (MMV). Bioloģijas licences pieteikuma (BLA) fāzes laikā vīrusu noņemšanas pētījumi parasti tiek veikti, izmantojot 3-5 specifiskus/nespecifiskus vīrusus, un tiek novērtētas 3-5 procesa darbības, lai pierādītu, ka produktam ir atbilstošs drošības faktors no vīrusu drošības perspektīva. Atšķirīgo vadlīniju dēļ gan mājās, gan ārvalstīs pastāv dažas atšķirības deklarācijām izmantotajās vīrusu attīrīšanas verifikācijas darbībās. Parasti izmantotās vīrusu attīrīšanas pārbaudes shēmas mAb ražošanas procesā ir parādītas 2. tabulā.
03 Vīrusu noņemšanas iespēja pakārtotajos procesos
3.1. Pakārtoto procesu spēja noņemt dažādus vīrusus
No 2009. gada monoklonālo antivielu produkti, kas tika iesniegti FDA attiecībā uz IND un BLA, A proteīna afinitātes hromatogrāfiju, zemu pH līmeni, anjonu apmaiņas hromatogrāfiju AEX (plūsmas iespiešanās režīms), katjonu apmaiņas hromatogrāfiju CEX (saistīšanas – eluēšanas režīms) un vīrusu klīrensu validāciju, izņemot vīrusu filtrēšana ir visbiežāk izmantotās indikatorvīrusu saimes, un to attīrīšanas efektu vidējais un diapazons ir parādīts 1. attēlā.
Retrovīrusiem, izņemot CEX, kura LRV ir aptuveni 3log10 (kā parādīts A joslu diagrammā 1. attēlā), pārējie procesi bija stabili (LRV ir lielāks par 4log10 vai vienāds ar to). Herpesvīrusiem un retrovīrusiem ir līdzīga klīrensa iedarbība un LRV > 4log10 (kā parādīts B joslu diagrammā 1. attēlā). Nelielus bezapvalka vīrusus, piemēram, parvovīrusu, ir grūtāk efektīvi noņemt, tie ir izturīgi pret ķīmisko apstrādi un nav viegli notverami ar filtriem (parādīts C-joslu diagrammā 1. attēlā). Tikai AEX un mazie vīrusu filtri bija efektīvi parvoviridae noņemšanā (vidējais LRV > 4log10).
1. attēlā parādītie procesi ir ProteinA, AEX (plūsmas iespiešanās režīms), CEX (vienlaicīgas eluēšanas režīms), zema pH inaktivācija ("nepilnīga "pret" pilnīga "noņemšana") un lielas un mazas atveres devīrusa filtrēšana.
3.2. Pakārtoto procesu ietekmējošie faktori uz vīrusu noņemšanas spēju
LRV vērtību sadalījums katram procesam ir parādīts 2. attēlā. Pētījumi ar 0 ~ 21og10 tika klasificēti kā zema LRV grupa, un tie, kuriem bija vairāk nekā 6log10, tika klasificēti kā augsta LRV grupa salīdzinošai analīzei.
3.2.1. ProteinA afinitātes hromatogrāfija
Nebija būtiskas korelācijas starp A proteīna procesa LRV vērtību un līdzsvara/mazgāšanas buferi, pildvielu, eluenta sastāvu un eluēšanas pH vērtību. Zemās LRV grupas kopsaucējs ir tas, ka izejviela ir diezgan sarežģīta, un var gadīties, ka kompleksā izejvielu un pildvielas mijiedarbība negatīvi ietekmē hromatogrāfijas kolonnas spēju noņemt vīrusus.
3.2.2. AEX (caurplūdes režīms)
Štrauss u.c. parādīja, ka AEX paraugu pH un vadītspēja var ietekmēt LRV. Tomēr Miesegaes et al statistikas rezultāti parādīja, ka līdzīgi kā ProteinA, AEX LRV (plūsmas iespiešanās režīms) nebija būtiskas korelācijas ar dažādiem buferiem, pildvielām, pH un vadītspēju, kas varētu būt saistīts ar pH un vadītspējas optimizāciju. ziņotās lietas procesa apstākļos.
3.2.3. CEX (saistīšana — eluēšanas režīms)
Vīrusu noņemšana ar CEX procesu nav pietiekami stabila. Nebija būtiskas korelācijas starp LRV augsta LRV grupā un buferi, pieredzes līmeni vai jebkādām hromatogrāfijas kolonnas īpašībām, piemēram, kolonnas augstumu un sveķu tipu. Tomēr augsta LRV pētījumā izmantotās līdzsvara/slodzes un eluācijas pH vērtības bija zemākas — 5,3±0,2; Zemā LRV grupā pH bija 6.0±0.2. Vēl viens faktors ir tas, ka sāls koncentrācija buferšķīdumā var izraisīt arī LRV vērtības atšķirību. Zemā LRV pētījumā izmantotajam buferim bija augstāka sāls koncentrācija ar vidējo koncentrāciju 290±120 mM iekraušanas/līdzsvarošanas šķīdumā un 340±70 mM eluentā, savukārt NaCl koncentrācijas augsta LRV pētījumā bija 58 ±27 mM un 183±31 mM attiecīgi.
3.2.4. Zema pH inaktivācija
Zema pH procesā pH ir galvenais procesa parametrs, un pH 3,8 ir pietiekams, lai retrovīrusu pēc pakāpes inaktivētu. Zema LRV grupai pH bija 3,9, savukārt augsta LRV pētījumam pH bija 3,4.
3.2.5. Vīrusu filtrēšanas noņemšana
Gan maziem, gan lieliem diafragmas filtriem MuLV noņemšanas LRV vērtība nebija mazāka par 2log10, un tikai 1% pētījumu bija zem 3log10 (parādīts h un i kolonnās 2. attēlā). Kopējais retrovīrusu klīrenss ar lielas diafragmas vīrusu filtriem bija zemāks nekā ar mazu atvērumu vīrusu filtriem (kā parādīts C joslu diagrammā 1. attēlā). Galvenais iemesls, kas ietekmē parvovīrusa noņemšanas rezultātu, ir dažādi filtru veidi. Parasti pretvīrusu filtrēšana var droši noņemt vīrusus.
Procesi ir proteīns A(a), AEX iespiešanās režīms (b), CEX saistīšanās - eluēšanas režīms (c), AEX saistīšanās Ⅰ eluēšanas režīms (d), zema pH inaktivācija ("nepilnīga" un" pilnīga "klīrenss) (e ~). g) un liela poru izmēra (h) un maza poru izmēra (i ~ j) devīrusa filtrēšana (kur a ~ i: retrovīruss; j: parvovīruss).
04 Inovācijas un izaicinājumi vīrusu drošības novērtēšanā
Nepārtraukta attīstība un inovācijas pakārtoto biofarmaceitisko procesu jomā neizbēgami radīs jauninājumus vīrusu attīrīšanas novērtēšanā. Augšupējo un pakārtoto procesu attīstība, piemēram, nepārtrauktas plūsmas bioprocesi, ir radījusi nepieciešamību novērtēt un izveidot efektīvus un stabilus vīrusu noņemšanas procesus. Nepārtrauktas plūsmas laikā tādas darbības kā vīrusu inaktivācija un vīrusu filtrēšana joprojām ir jāveic pakešu režīmā. Lai gan hromatogrāfisko procesu vīrusa noņemšanas spējai nepārtrauktas plūsmas režīmā nevajadzētu būtiski atšķirties no pakešapstrādes spējas, tā ir jāatbalsta ar datiem.
05 Outlook
No virusoloģiskās drošības perspektīvas biofarmācijas nozares lielisko drošību lielā mērā var saistīt ar nozares stingru ievērošanu trīs galvenajām vīrusu drošības stratēģijām: adekvāta materiālu un šūnu banku avotu iegūšana un testēšana, vīrusu klīrensa novērtējumu dokumentēšana (vīrusu validācijas pētījumi) un vīrusu testēšana procesa laikā. Jaunu šūnu substrātu ražoto bioloģisko zāļu īpašības var mainīties ar dažādiem riskiem, un ir nepieciešamas labas riska pārvaldības stratēģijas, lai nodrošinātu bioloģisko zāļu drošību. Guidling Technology ir pieredzējusi profesionāla tehniskā komanda, kas aptver filtrēšanas procesu no neliela izmēģinājuma, izmēģinājuma izmēģinājuma līdz liela mēroga ražošanai, mūsu membrānas un membrānas filtri tiek plaši izmantoti pirmsfiltrācijā, mikrofiltrācijā, ultrafiltrācijā, nanofiltrācijas koncentrācijā, ekstrakcijā un atdalīšanā; Mūsu daudzās produktu līnijas, sākot no mazas vienreizējas lietošanas laboratorijas filtrēšanas līdz uz ražošanu orientētām filtrēšanas sistēmām, sterilitātes pārbaudei, fermentācijai, šūnu kultūrai un citiem, nodrošina paaugstinātu produktivitāti.
Jiuling nodrošināt produktu kvalitāti kā pirmo rādītāju, cenšoties "samazināt izmaksas, palielināt efektivitāti" ceļā, lai izpētītu, ceram uz sadarbību ar jums nākotnē, lai risinātu nozares izaicinājumus un meklētu labāku attīstību.
