Atbildes uz profesionāliem jautājumiem par ultrafiltrācijas centrbēdzes cauruli

1. Kāds ir ultrafiltrācijas caurules membrānas materiāls?

Poliētersulfona membrānai ir skaidra un precīza molekulmasas pārtveršana, stabilas fizikālās un ķīmiskās īpašības, ārkārtīgi zema olbaltumvielu adsorbcija un augsta produkta atgūšana

2. Ja ir jāatdala olbaltumvielas ar dažādu molekulmasu, cik lielai atšķirībai ir nepieciešama olbaltumvielu molekulmasa?

Abiem proteīniem ir jāatšķiras 10 vai vairāk reizes pēc izmēra

3. Vai vīrusu koncentrēšanai var izmantot ultrafiltrācijas centrifūgas cauruli?

Ultrafiltrācijas centrifūgas caurule var koncentrēt vīrusu vairākas reizes vai pat ļoti daudz. Mums ir īpaša vīrusa membrāna. Dažādiem vīrusiem ir jāizvēlas atbilstošs membrānas poru izmērs

4. Vai ultrafiltrācijas centrifūgas caurule var būt dezinficēta un izturīga pret sārmiem?

To var dezinficēt ar 75 procentu etanola ūdens šķīdumu. Mūsu materiāls var izturēt 0,1-0,5n nātrija hidroksīda sārmainu mazgāšanu

5. Vai ultrafiltrācijas centrifūgas cauruli var izmantot augstspiediena sterilizācijai

Mums ir īpaša ultrafiltrācijas centrifūgas caurule, kas piemērota augsta spiediena{0}}sterilizācijai

6. Vai, ņemot vērā proteīna stabilitāti, ultrafiltrācijas cauruli var centrifugēt zemā temperatūrā?

Jā, mūsu materiāls ir izturīgs pret zemu temperatūru, bet koncentrācijas laiks būs ilgāks. Membrānas filtrēšanas ātrums ir saistīts ar padeves šķidruma temperatūru

7. Par atgūšanas ātrumu

Parasti izšķīdušo vielu, kuru koncentrācija ir lielāka par 0,1 mg/ml, atgūšanas ātrums ir 90 procenti vai vairāk. Parasti paraugu zudumu izraisa nespecifiska adsorbcija uz filtra membrānas virsmas un materiāla caurules virsmas. Lai iegūtu augstu reģenerācijas ātrumu, atlasītās filtra membrānas saglabātā molekulmasa ir aptuveni 1/3 no mērķa proteīna, ultrafiltrācijas membrāna ir asimetriska membrāna, tās poru izmērs ir normāli sadalīts, un tā var noplūst centrbēdzes augstumā. spiedienu. Šādos apstākļos proteīna šķidrums var tikt deformēts, tāpēc, jo mazāka ir pārtveršanas apertūra, jo lēnāks ir plūsmas ātrums, bet atgūšanas ātrums būs lielāks.

8. Kad olbaltumvielas ir koncentrētas, rodas nokrišņi. Kā ar to tikt galā?

Ja proteīns tiek koncentrēts pārāk ātri vai pārāk daudz, tas var izraisīt olbaltumvielu nogulsnēšanos. Galīgā koncentrācija pēc olbaltumvielu koncentrācijas nedrīkst būt pārāk augsta; Olbaltumvielām, kas ir jutīgas pret koncentrācijas ātrumu un viegli nogulsnējas, ieteiktās uzlabošanas metodes ir šādas:

1) Samaziniet centrbēdzes ātrumu,

2) Izmantojiet ultrafiltrācijas membrānu ar lielāku molekulmasu

3) Izpūtiet un iesūciet koncentrācijas cauruli un pēc tam centrifugējiet

9. Kādi ir iespējamie iemesli, kāpēc ultrafiltrācijas centrifūgas cauruli nevar centrifugēt?

Ja ultrafiltrācijas cauruli nevar centrifugēt, sākotnējo centrifugēšanu var veikt ar aptuveni 20 procentu etanola ūdens šķīdumu, jo pēc ultrafiltrācijas membrānas pilnīgas žāvēšanas membrānas virsma ir vāji hidrofoba, un plūsmu var atjaunot pēc mērcēšanas ar zemu virsmu. spriedzes šķīdinātājs

10. Ultrafiltrācijas caurules pareiza lietošana un konservēšana

Pirms lietošanas ultrafiltrācijas cauruli vispirms centrifugē ar attīrītu ūdeni, lai pārbaudītu tās integritāti. Pēc katras lietošanas reizes tas jāuzglabā mitrā stāvoklī, lai novērstu membrānas izžūšanu

11. Kā izņemt endotoksīnu no ultrafiltrācijas caurules?

Mūsu nodrošinātā ultrafiltrācijas caurule nav apstrādāta ar endotoksīnu. Tajā pašā laikā, tā kā endotoksīni dabā ir plaši izplatīti, paraugus, kuriem nepieciešami iekšējie toksīni, pirms eksperimenta var iepriekš notīrīt ar 0,5N nātrija hidroksīdu un pēc tam notīrīt ar RO ūdeni, lai noņemtu lielāko daļu endotoksīna.

12. Analizējot koncentrēto proteīnu lejup pa straumi, tiek konstatēts, ka ir traucējumi. Kāds ir iemesls?

Ultrafiltrācijas cauruli var iepriekš notīrīt ar buferšķīdumu vai attīrītu ūdeni. Ja traucējumi joprojām pastāv, notīriet to ar 0,1N nātrija hidroksīdu un pēc tam notīriet ar attīrītu ūdeni.

13. Koncentrācijas procesā var būt nespecifiska adsorbcija starp mērķa proteīnu un ultrafiltrācijas membrānu. Kā to uzlabot?

Mēs izmantojam hidrofilo poliētersulfona membrānu, bet dažiem proteīniem ar īpašām īpašībām var uzlaboties to nespecifiskā adsorbcija ar membrānu. Šādā gadījumā mēs varam mēģināt iepriekš apstrādāt ultrafiltrācijas cauruli pirms eksperimenta vai sazināties ar mūsu inženieri

14. Pēc koncentrēšanas tiek konstatēts, ka koncentrātā nav mērķa proteīna. Kādi ir iespējamie iemesli?

1) Sākotnējā olbaltumvielu koncentrācija nedrīkst būt pārāk zema. Ja koncentrācija ir pārāk zema, membrāna var netikt noturēta

2) Izvēlieties atbilstošu membrānas poru izmēru. Ultrafiltrācijas caurules centrifugēšana un koncentrēšana pieder pie strupceļa filtrēšanas. Membrānas poru izmērs parasti ir mazāks par 2 reizēm vai vairāk par mērķa proteīnu

3) Izvēlieties atbilstošu centrbēdzes ātrumu

4) vai mērķa proteīns izgulsnējas