DEAE vājās anjonu apmaiņas membrānas hromatogrāfija

DEAE vājās anjonu apmaiņas membrānas hromatogrāfija — produkta ievads

 

1. Pārskats

DEAE vājā anjonu apmaiņas hromatogrāfija ir attīrīšanas metode, kuras pamatā ir dažādu biomolekulu lādiņa īpašību un lādiņa blīvuma atšķirības. Tā kā lielākā daļa biomakromolekulu satur funkcionālās grupas, piemēram, karboksilgrupas vai hidroksilgrupas, to lādiņa raksturlielumus un lielumu var pielāgot, mainot buferšķīduma pH. Pēc tam, kad biomolekulas saistās ar pretēji lādētu anjonu vai katjonu apmaiņas vidi, atdalīšana tiek panākta, mainot kustīgās fāzes jonu stiprumu vai pH. Vispirms tiek eluētas molekulas ar vājāku saistīšanās afinitāti, pēc tam molekulas ar spēcīgāku saistīšanās afinitāti, tādējādi panākot efektīvu atdalīšanu

 

2. Produkta priekšrocības

2.1. Augsta efektivitāte: nodrošina spēcīgu saistīšanu ar plūsmas ātrumu, kas līdz pat 40 reizēm pārsniedz hromatogrāfiju, kuras pamatā ir sveķi. Salīdzinot ar tradicionālo -slāņa hromatogrāfiju, membrānas hromatogrāfija saīsina kopējo procesa laiku aptuveni 30–40 reizes.

2.2. Augsta saistīšanās efektivitāte: membrānas hromatogrāfijai ir augsta saistīšanās spēja un liels plūsmas ātrums zemā spiediena krituma apstākļos, ļaujot lādētas biomolekulas uztvert vienā caurgājienā caur kolonnu.

2.3. Mērogojams un elastīgs: visas membrānas hromatogrāfijas produktu sērijas var apmierināt dažādas biomakromolekulu attīrīšanas vajadzības, aptverot visus posmus, sākot no procesa izstrādes līdz liela mēroga{1}}ražošanai. Kapsulas-tipa konstrukcijas dizains atbalsta gan vienreizējas-lietošanas darbību, gan atkārtotu lietošanu pēc tīrīšanas.

2.4 Uzlabota produktivitāte: kompaktais dizains samazina telpas nospiedumu. Likvidējot kolonnu iepakošanas, tīrīšanas, tīrīšanas validācijas un kolonnas uzglabāšanas procedūras, sistēmu var darbināt uzreiz pēc bufera līdzsvarošanas bez kolonnas iepakošanas vai uzglabāšanas. Darbaspēka izmaksas var samazināt līdz pat 50%.

 

3. Tehniskie parametri

3.1. Strukturālie materiāli

	laboratorijas mērogs	maza mēroga	izmēģinājuma mērogs	ražošanas apjoms
Membrānas tilpums	0,2 ml	5 ml	140 ml	5L
Membrānas atbalsta struktūra	Polipropilēns (PP)
Membrānas korpuss	Polipropilēns (PP)
O gredzens	Silikona

3.2. Darbības raksturlielumi

	laboratorijas mērogs	maza mēroga	izmēģinājuma mērogs	Ražošanas mērogs
Membrānas tilpums	0,2 ml	5 ml	400 ml	5L
Ieteicamais plūsmas ātrums	1-6 ml/min	25-150 ml/min	2-12L/min	25-150L/min
Maksimālā darba temperatūra	35 grādi
Maksimālais darba spiediens	3 bāri (25 grādi)
Maksimālais diferenciālais spiediens	3 bāri (25 grādi)
Uzglabāšanas apstākļi	20% 乙醇水溶液 20% etanola ūdens šķīdums

1. attēls. Membrānas hromatogrāfijas slodzes kapacitātes izmaiņas pēc vairākām lietošanas reizēm, kas uzraudzītas ar BSA.

Turklāt mēs novērtējām saimniekšūnu proteīnu un nukleīnskābju noņemšanas efektivitāti, izmantojot DEAE membrānas hromatogrāfiju. Rezultāti ir šādi.

	DNS				HCP
	IgG atgūšana	Saturs (pg/mg IgG) ar RT PCR		Izņemšanas faktors	Elisa saturs (ng/mg IgG).		Izņemšanas faktors
Skrien	%	Pirms DEAE membrānas	Pēc DEAE membrānas	Žurnāls	Pirms DEAE membrānas	Pēc DEAE membrānas	Žurnāls
1	96.7	423	3.5	2.08	7.8	5	0.19
2	97.4	438	6	1.86	7.7	4.9	0.20
3	94.7	513	8	1.81	6.3	1.9	0.52
4	95	32	2	1.20	6	4.2	0.15
5	96.3	45	6	0.88	8.1	5.2	0.19
6	96.5	158	3	1.72	8.7	6.2	0.15
7	96.4	267	2	2.13	9.8	7.1	0.14
8	96.8	298	7	1.63	9.4	8.2	0.06
9	97.1	746	5	2.17	4.3	2.6	0.22
10	96.6	39	2	1.29	4.4	1.7	0.41

1. tabula. DNS un saimniekšūnu proteīnu izņemšanas ātrums no CHO-izpaustā IgG, izmantojot DEAE membrānas hromatogrāfiju.

Eksperimentu sērija parādīja, ka Q membrānas hromatogrāfija var efektīvi noņemt piemaisījumus, vienlaikus saglabājot augstu mērķa IgG atgūšanas ātrumu.

Turklāt mēs salīdzinājām Gudiling membrānas hromatogrāfiju ar importētajiem zīmoliem, un kravnesības dati ir šādi.

2. attēls. Dažādu proteīnu ielādes veiktspēja mūsu membrānas hromatogrāfijā un konkurentu produktos

Kopējais novērtējums liecina, ka mūsu kravnesība ir salīdzināma ar importēto produktu kravnesību.

3. attēls. DEAE membrānas hromatogrāfijas moduļa veiktspēja kolagēna proteīna testēšanā

Izmantojot DEAE membrānas hromatogrāfijas moduli, validācijas rezultāti parādīja, ka lielāko daļu mērķa kolagēna proteīnu var uztvert un eluēt, izmantojot 135 mM NaCl.

Pārbaudot dažādos eluēšanas apstākļos, mēs atklājām, ka membrānas hromatogrāfijai un agarozes gēla hromatogrāfijai ir līdzīga eluēšanas uzvedība, kur olbaltumvielu tīrība ievērojami atšķiras dažādās sāls koncentrācijās. Praktiskajā pētniecībā, attīstībā un ražošanā ir nepieciešams kvantitatīvi noteikt optimālos līdzsvara eluēšanas apstākļus, lai iegūtu augstas -tīrības mērķa proteīnus.

 

4. Klasiskie pieteikumu gadījumi

DNS, vīrusu, saimniekšūnu proteīnu un endotoksīnu noņemšana

Plazmīdu, vīrusu, nukleīnskābju un olbaltumvielu uztveršana, kā arī oligonukleotīdu attīrīšana

 

5. Darbības darbplūsma

5.1: Iekārtas sagatavošana un montāža

5.1.1. Membrānas hromatogrāfijas modulis jāuzstāda AKTA hromatogrāfijas sistēmā līdzīgi pildītām sveķu kolonnām, nodrošinot, ka plūsmas virziens sakrīt ar bultiņām un ieplūdes virzienu. Savienojiet, izmantojot Luer savienotājus vai skavas armatūru.

5.1.2 Iestatiet ieplūdes plūsmas ātrumu uz 5–10 MV/min un izmantojiet līdzsvarošanas buferi, lai iztīrītu gaisu. Turpiniet skalošanu, līdz pie izejas nav redzami burbuļi, pēc tam pievienojiet permeāta izvadu hromatogrāfijas sistēmai.

5.2:Ārstēšana pirms-lietošanas

5.2.1. Iestatiet ieplūdes plūsmas ātrumu uz 5–10 MV/min un veiciet priekšapstrādi ar 0,5 M NaOH vairāk nekā 5 MV, lai nodrošinātu, ka membrāna sasniedz līdzsvaru.

5.2.2.: ar tādu pašu plūsmas ātrumu tālāk -apstrādājiet ar līdzsvara buferšķīdumu (1 × PBS) vairāk nekā 5 MV, lai nodrošinātu, ka membrāna sasniedz līdzsvaru.

5.3 Hromatogrāfijas process

5.3.1

Iestatiet ieplūdes plūsmas ātrumu uz 5–10 MV/min un iepriekš apstrādājiet ar līdzsvara buferi vairāk nekā 5 MV, līdz membrāna sasniedz līdzsvaru.

5.3.2

Kad paraugs ir iepriekš-filtrēts caur 0,22 μm filtru, ielādējiet paraugu, līdz ielāde ir pabeigta vai tiek sasniegta hromatogrāfijas ielādes jauda.

5.3.3

Mazgāt ar līdzsvara buferšķīdumu ilgāk par 10 MV, līdz UV absorbcija samazinās līdz bāzes līmenim.

5.3.4

Izmantojiet gradienta eluēšanu vai lineāro eluēšanu saskaņā ar procesa plānu un pēc vajadzības savāciet paraugus frakcijās.

5.4. CIP pēc-lietošanas apstrāde — membrānas hromatogrāfijas ierīces CIP

5.4.1

Iestatiet ieplūdes plūsmas ātrumu uz 5–10 MV/min un veiciet tīrīšanas -vietas (CIP) apstrādi ar 0,5 M NaOH ilgāk par 10 MV, līdz UV absorbcija nokrītas zem bāzes līnijas.

5.4.2

Pēc cirkulācijas mazgāšanas 30 minūtes pārejiet uz mazgāšanu ar ūdeni, līdz pH ir no 7 līdz 8, pēc tam turpiniet tīrīšanu ar 20% etanolu, līdz vadītspēja paliek gandrīz nemainīga.

5.5, Membrānas hromatogrāfijas uzglabāšana:

Pēc lietošanas un CIP pabeigšanas membrānas moduli var noņemt un uzglabāt, iemērcot 20% etanolā, vai uzglabāt tiešsaistē istabas temperatūrā 20% etanola šķīdumā. 20% etanola šķīdums ir periodiski jāpārbauda un jānomaina.

 

6.Pasūtīšanas informācija

DEAE-tipa vājās anjonu apmaiņas membrānas hromatogrāfijas kapsulas filtrs

	Laboratorijas-skali	maza mēroga	Pilotu skala	Ražošanas mērogs
Produkta modelis	IEXD0002ES	IEXD0050ES	IEXD0400ES	IEXD5000ES
Membrānas tilpums	0,2 ml	5 ml	400 ml	5L

Populāri tagi: deae vāja anjonu apmaiņas membrānas hromatogrāfija, Ķīna, piegādātāji, ražotāji, rūpnīca, vairumtirdzniecība, lielapjoma, noliktavā, bezmaksas paraugs