Bieži uzdotie jautājumi par centrbēdzes filtru ierīcēm

Q1. Ir nepieciešams atdalīt olbaltumvielas ar dažādu molekulmasu, tad cik lielai atšķirībai vajadzētu būt olbaltumvielu molekulmasām?

A: Abu proteīnu lielumam ir jāatšķiras 10 vai vairāk reizes.

 

Q2. Var centrifugētAlfiltru ierīces ir sterilizētas un izturīgas pret sārmu mazgāšanu?

A: To var sterilizēt ar 75% etanola ūdens šķīdumu, un membrāna var izturēt 0.1-0,5N nātrija hidroksīda sārmu mazgāšanu.

 

Q3. Kā rīkoties, ja koncentrēšanās laikā proteīns izgulsnējās?

A: Ja proteīns tiek koncentrēts pārāk ātri vai pārāk koncentrēts, tas var izraisīt olbaltumvielu nogulsnēšanos, un proteīna galīgā koncentrācija pēc koncentrācijas nedrīkst būt pārāk augsta; Proteīni, kas ir jutīgi pret koncentrācijas ātrumu un mēdz izgulsnēties, ieteiktā uzlabošanas metode:

Samaziniet centrbēdzes ātrumu

Izmantojiet ultrafiltrācijas membrānu ar augstāku molekulmasas robežvērtību

Izpūtiet un iesūc koncentrēto mēģeni un pēc tam centrifugējiet

 

Q4. Kāds ir iespējamais iemesls, kāpēccentrbēdzes filtru ierīcesnevar centrifugēt?

A: Sākotnējai centrifugēšanai varat izmantot apmēram 20 procentu etanola ūdens šķīdumu, ja ultrafiltrācijas cauruli nevar centrifugēt, jo ultrafiltrācijas membrāna ir pilnīgi sausa, membrānas virsma ir vāji hidrofoba un plūsmu var atjaunot pēc infiltrācijas ar zemu virsmas spraiguma šķīdinātājs.

 

Q5. Centrbēdzes filtru ierīču pareizas lietošanas metodes un uzglabāšana

A: Pirms lietošanas centrbēdzes filtra ierīces jācentrifugē ar attīrītu ūdeni, lai pārbaudītu to integritāti. Pēc katras lietošanas reizes tas ir jāuzglabā mitrā stāvoklī, lai novērstu membrānas izžūšanu.

 

Q6. Kā centrbēdzes filtra ierīces noņem endotoksīnu?

A. Mūsu nodrošinātās centrbēdzes filtru ierīces nav apstrādātas ar endotoksīniem, un, tā kā endotoksīni dabā ir plaši izplatīti, paraugus, kuriem nepieciešami endotoksīni, pirms eksperimenta var iepriekš notīrīt ar 0,5N nātrija hidroksīdu un pēc tam mazgāt ar RO ūdeni, lai noņemtu lielāko daļu endotoksīna.

 

Q7. Kad koncentrēto proteīnu izmanto pakārtotajai analīzei, tiek konstatēts, ka ir traucējumi, kāds ir iemesls?

A: Centrbēdzes filtru ierīces var iepriekš mazgāt ar buferšķīdumu vai attīrītu ūdeni. Ja traucējumi joprojām pastāv, nomazgājiet ar 0,1N nātrija hidroksīdu un pēc tam mazgājiet ar attīrītu ūdeni.

 

Q8. It tiek konstatēts, ka pēc koncentrācijas koncentrātā nav mērķa proteīna. Kādi ir iespējamie iemesli?

A: 1) Sākotnējā proteīna koncentrācija nedrīkst būt pārāk zema, ja koncentrācija ir pārāk zema, membrāna var nespēt noturēties.

2) Izvēlieties atbilstošu membrānas poru izmēru. Filtra caurules centrbēdzes koncentrācija pieder strupceļa filtrēšanai, un membrānas poru izmērs parasti ir mazāks par 2 reizēm vai vairāk nekā mērķa proteīnam.

3) Izvēlieties pareizo centrbēdzes ātrumu

4) vai mērķa proteīns izgulsnējas

 

Q9. Centrbēdzes filtru ierīču pasivācijas apstrāde

A: Centrbēdzes filtru ierīču virsmas pasivācijas pirmapstrāde var samazināt proteīna adsorbcijas zudumus uz membrānas virsmas, vairumā gadījumu kolonnas pirmapstrāde pirms atšķaidītā proteīna šķīduma koncentrēšanas var uzlabot atgūšanu, jo šķīdums var aizpildīt eksponēto. tukšām proteīnu adsorbcijas vietām uz membrānas un virsmas, pasivēšanas metode ir kolonnu iepriekš mērcēt ar lielu pasivēšanas šķīduma daudzumu ilgāk par 1 stundu, rūpīgi izskalot kolonnu ar destilētu ūdeni un pēc tam vienu reizi centrifugēt kolonnu ar destilētu ūdeni. lai pilnībā noņemtu pasivācijas šķīdumu, kas var palikt uz membrānas, uzmanieties, lai membrāna pēc pasivēšanas neizžūtu, ja vēlaties to paturēt turpmākai lietošanai, jums jāpievieno sterils destilēts ūdens, lai membrāna būtu mitra., lūdzu, sazinieties ar mūsu inženieri kopīgiem pasivēšanas risinājumiem.

 

Q10. Vai ultrafiltrācijas membrāna hierarhiski filtrē molekulas?

A: Generally speaking, if the dead-end filtration method is used, it is difficult to accurately remove small molecules among several large molecules by ultrafiltration method. This is because the membrane is a porous network structure, and its filtration mechanism is based on retention rather than passage, such as, the cut off rate of molecules larger than 100kd is >95 procenti, ja tiek izmantota 100 kd ultrafiltrācijas membrāna, tomēr molekulas, kas ir mazākas par membrānas poru izmēru, pilnībā neiziet cauri membrānai. Molekulārās aiztures līmenis 67 kd ir vairāk nekā 70 procenti, un 43 kd proteīns ir arī vairāk nekā 40 procenti, dažādi komponenti jauktā šķīdumā iziet cauri membrānai nav tik vienkārši un viegli kā viena komponenta šķīdums. , ja vēlaties izolēt divas makromolekulas, molekulmasu starpībai starp tām jābūt astoņām vai vairāk reizēm.

 

Q11. Kā efektīvi atdalīt lielas un mazas molekulas, izmantojot ultrafiltrāciju?

A: Sakarā ar procesa vajadzībām makromolekulās tiek noņemti piemaisījumi vai mazās molekulas tiek noņemtas no makromolekulām, tas ir normāli ražošanā. Ir ļoti nepieciešams izvēlēties atbilstošu membrānas poru izmēru, filtrēšanas metodi un darbības apstākļus. Vispārīgi runājot, ja starp diviem proteīniem ir izvēlēta membrānas MWCO specifikācija, var panākt salīdzinoši ideālu atdalīšanu. Ja proteīna šķīdums ir salīdzinoši atšķaidīts, arī darbība zemā spiedienā palīdzēs sasniegt labākus rezultātus. Izvēlieties tangenciālās plūsmas filtrēšanu un veiciet vairākkārtēju diafiltrāciju, lai iegūtu labāku atdalīšanas efektu.