Ultrafiltrācijas caurules apkope un lietošanas metode
Ultrafiltrācijas caurules apkope un lietošanas metode
Ultrafiltrācijas caurules funkcija:
1) Koncentrēšanās; 2) Atsāļošana; 3) Nomainiet buferi; 4) Tam ir daļējas attīrīšanas efekts.
1. Jauno ultrafiltrācijas cauruli var izmantot tieši bez citas apstrādes;
2. Ultrafiltrācijas cauruli nevar sterilizēt augstā temperatūrā;
3. Ultrafiltrācijas caurules apstrāde, mainot koncentrētu proteīnu
Ultrafiltrācijas cauruli var izmantot atkārtoti. Iemērciet to 0.1M NaOH 1-2h, nomazgājiet ar ūdeni un pēc tam 3 reizes mazgājiet ar atbilstošu šķīdumu (sterilizētu ūdeni vai PBS) uz centrifūgas, ko var izmantot, lai koncentrētu jaunu proteīnu;
4. Parasti novietotas ultrafiltrācijas caurules apstrāde
Bieži izmantotajai ultrafiltrācijas caurulei iemērciet to 0,1M NaOH 1–2 h, nomazgājiet ar ūdeni un iemērciet sterilizētā ūdenī. Noteikti turiet filtra membrānu mitru un neļaujiet baktērijām vairoties;
5. Ultrafiltrācijas caurules apstrāde, kas novietota uz ilgu laiku
Ja ultrafiltrācijas caurule netiek lietota ilgu laiku, iemērciet to 0,1M NaOH 1–2 h, nomazgājiet ar ūdeni un iemērciet to 20 procentu etanolā uzglabāšanai. Noteikti turiet filtra membrānu mitru un neļaujiet baktērijām vairoties;
6. Ultrafiltrācijas caurulei izmantotais centrbēdzes ātrums
Centrbēdzes ātrums parasti ir 4000 apgr./min (parasti ieteicams 3000 g, un maksimālais ātrums nedrīkst pārsniegt 4000 g). Pēc centrifugēšanas 5-8 minūtes, 4 ml parauga var koncentrēt mazāk nekā 1 ml līdz desmitiem mikrolitru; Ja ātrums ir pārāk liels, mērķa proteīns nokrīt, kā rezultātā tiks zaudēts mērķa proteīns; Zems ātrums, laikietilpīgs un zema darba efektivitāte;
7. Piesardzības pasākumi, ja pistoles galva iestiepjas ultrafiltrācijas caurulē
Pievienojot proteīna šķīdumu vai buferšķīdumu ultrafiltrācijas caurulei, var izmantot zilo pistoles galvu; Tomēr, kad koncentrētais mērķa proteīns tiek absorbēts no ultrafiltrācijas caurules apakšas, ir jāizmanto dzeltenā pistoles galva; Kad pistoles galva ir ievietota ultrafiltrācijas caurulē, tā nedrīkst pieskarties filtra membrānai, lai izvairītos no filtra membrānas caurduršanas;
8. Samaziniet olbaltumvielu adsorbcijas zudumus ultrafiltrācijas caurulē
Ultrafiltrācijas caurules membrāna var adsorbēt proteīnu, kas samazina mērķa proteīnu par aptuveni 30 procentiem; Lai samazinātu proteīna zudumu, pēc mērķa proteīna šķīduma absorbcijas iztīriet ultrafiltrācijas caurules dibenu ar proteīna buferšķīdumu, lai nomazgātu lielāko daļu filtra membrānā adsorbētā proteīna un samazinātu mērķa proteīna zudumu; Ja attīrītais proteīns ir koncentrēts, pievērsiet uzmanību, lai koncentrētais tilpums nebūtu pārāk mazs; Parasti, neatkarīgi no tā, cik centrifugēts, aptuveni 200 µL proteīna šķīdums tiks saglabāts apakšā;
9. Kā definēt ultrafiltrācijas caurules atteici
Parastā lietošanā, kad filtra membrāna nav caurdurta, koncentrētais proteīna šķīdums nesatur proteīnu vai daudzums ir ļoti mazs (ieskaitot mērķa proteīnu), savukārt pirmais filtrētais šķīdums satur mērķa proteīnu, tas norāda, ka filtra membrāna ir nederīga un jāaizstāj ar jaunu ultrafiltrācijas cauruli.
